小鼠肾损伤模型如何检测UACR？小鼠UACR检测全流程解析尿白蛋白ELISA、尿肌酐Jaffe法与肾功能评价

摘要： 尿白蛋白/肌酐比值（UACR）是小鼠肾损伤、糖尿病肾病、药物肾毒性和遗传性肾病研究中常用的无创尿液指标。与单独检测尿白蛋白浓度相比，UACR通过同步检测同一份尿液样本中的白蛋白与肌酐，以肌酐作为尿液浓缩稀释校正因子，可以提升随机尿和点尿样本之间的可比性。本文围绕小鼠UACR检测的实验逻辑、Albuwell M小鼠尿白蛋白竞争性ELISA、Creatinine Companion改良Jaffe法尿肌酐检测、样本采集保存、标准曲线、结果换算和数据解读要点展开整理，为动物模型肾功能研究提供实验参考。

关键词：UACR、尿白蛋白肌酐比值、小鼠肾功能检测、尿白蛋白检测、尿肌酐检测、糖尿病肾病、药物肾毒性、Albuwell M、Creatinine Companion、Jaffe法、Ethos Exocell

小鼠肾功能研究为什么常用UACR

在小鼠肾损伤、糖尿病肾病、药物肾毒性、遗传性肾病和肾脏保护机制研究中，尿液检测具有明显优势。它不需要反复取血或牺牲动物，可以在同一只动物身上进行纵向追踪，动态观察肾小球滤过屏障功能、尿蛋白排泄水平以及药物干预或基因操作后的肾脏表型变化。尿白蛋白升高通常提示肾小球滤过屏障选择性下降，是评价肾功能改变和肾病模型进展的重要指标之一。

但小鼠尿液样本本身存在明显波动。动物饮水量、排尿量、采样时段、采样方式、代谢笼环境和点尿收集方法，都会影响尿液浓缩或稀释程度。如果只检测尿白蛋白绝对浓度，很难区分白蛋白升高究竟来自真实蛋白排泄增加，还是来自尿液被浓缩后造成的浓度升高。尤其是随机尿和点尿样本，样本量通常较少，浓缩稀释差异更明显，因此更需要使用归一化指标。

尿白蛋白/肌酐比值（urinary albumin-to-creatinine ratio，UACR，也常简称ACR）正是为了解决这一问题。UACR通过同步检测同一份尿液中的白蛋白和肌酐，用肌酐作为内参校正尿液浓缩稀释影响，反映单位肌酐背景下的白蛋白排泄水平。对于同一模型体系内的组间比较，或者同一动物在不同时间点的纵向追踪，UACR可以让尿白蛋白数据更具可比性。围绕Ethos Exocell小鼠尿白蛋白、尿肌酐和UACR检测相关资料，可参考Ethos Exocell肾功能检测资料页面。

UACR检测的基本组成：白蛋白检测加肌酐校正

UACR不是一个单独的检测项目，而是由两项独立检测结果换算得到。第一项是尿白蛋白检测，用于评价尿液中白蛋白排泄水平；第二项是尿肌酐检测，用于校正尿液浓缩稀释程度。只有两项检测使用同一份尿液样本，并且检测结果单位换算正确，最终得到的UACR才具有解释价值。

小鼠研究中常见的商业化组合是Ethos Exocell的Albuwell M小鼠尿白蛋白检测试剂盒与Creatinine Companion尿肌酐检测试剂盒。前者采用小鼠尿白蛋白竞争性ELISA方法，适用于微量尿样中的白蛋白定量；后者基于改良Jaffe碱性苦味酸法，通过加酸前后吸光度差值校正非肌酐色原干扰，适合批量尿液样本中的肌酐检测。二者均为96孔板格式，便于同批次样本并行检测和统一数据处理。

图1. Albuwell M小鼠白蛋白ELISA检测试剂盒，货号1011

尿白蛋白检测：竞争性ELISA如何定量小鼠白蛋白

Albuwell M属于免疫化学法中的ELISA检测方案，采用直接竞争性抗体捕获ELISA原理。微孔板预包被小鼠白蛋白，实验时向孔中加入尿液样本和HRP标记的抗小鼠白蛋白抗体。样本中的游离白蛋白会与固相包被白蛋白竞争结合酶标抗体。样本白蛋白浓度越高，能够结合到固相包被白蛋白上的酶标抗体就越少，最终显色信号越低。

这个方法与夹心ELISA的逻辑不同。夹心法通常是目标物越多，信号越强；竞争法则是目标物越多，固相结合酶标抗体越少，吸光度越低。因此在结果计算时，标准曲线通常以白蛋白浓度对数与吸光度之间的关系进行拟合。原文中提到，该试剂盒标准曲线范围为0.156–10 μg/mL，包含7个倍比稀释浓度点。实际检测中，尿液样本需要经过合适稀释，使检测值落在标准曲线范围内，否则需要重新调整稀释倍数。

在显色阶段，洗去未结合物质后加入TMB底物，HRP催化显色反应，硫酸终止后在450 nm波长读取吸光度。由于吸光度与液相样本中白蛋白浓度的对数成反比，计算时需要特别注意标准曲线方向和稀释倍数。对初次开展实验的样本，建议设置原液、1:21和1:81等不同稀释度，先判断样本大致浓度范围，再确定后续批量检测稀释比例。

尿肌酐检测：改良Jaffe法如何降低非肌酐干扰

尿肌酐检测用于校正尿液浓缩稀释程度。Creatinine Companion基于经典Jaffe碱性苦味酸法改良，通过加酸前后双波长差吸光度计算，降低尿液中非肌酐色原造成的干扰。其基本原理是在碱性条件下，肌酐与苦味酸反应生成有色复合物；随后加入酸试剂后，肌酐-苦味酸复合物发生特异性分解，而非肌酐色原的显色相对不受影响。通过计算加酸前后的吸光度差值，即可更特异地反映肌酐浓度。

图2. The Creatinine Companion尿肌酐检测试剂盒，货号1012

与HPLC方法相比，改良Jaffe法的优势在于操作更简便、成本更低、适合96孔板批量检测。对于动物模型研究中大量尿液样本检测来说，这种方法更便于日常实验室使用。原文中提到，试剂盒包含1、3、10 mg/dL三个浓度的肌酐标准品，检测线性范围为1–10 mg/dL，也就是10–100 μg/mL。样本检测前通常推荐使用蒸馏水做1:20稀释，但具体稀释倍数仍需根据小鼠尿液肌酐水平进行调整。

计算时，先读取碱性条件下的初次吸光度，再加入酸试剂并读取第二次吸光度。每孔的ΔAbs等于初次吸光度减去加酸后的吸光度。随后以标准品肌酐浓度为横轴、ΔAbs为纵轴进行线性回归，将样本ΔAbs代入标准曲线，得到稀释后浓度，再乘以稀释倍数得到原始尿液肌酐浓度。肌酐检测结果的准确性会直接影响UACR，因此样本稀释、标准品复孔和线性范围控制都很关键。

样本采集和保存：UACR误差往往从尿液样本开始

UACR检测的前提是尿液样本可靠。小鼠尿液采集常见方式包括24小时尿样和随机尿/点尿样。24小时尿样通常使用代谢笼收集，可以记录总排泄量，适合计算24小时尿白蛋白排泄量，结果相对完整，但操作复杂，对动物状态也有一定影响。随机尿和点尿样本可通过腹部按摩或将小鼠放置于96孔板上方等方式采集，操作简便，更适合较大批量和纵向追踪，但受浓缩稀释影响更明显，因此必须结合肌酐校正。

采样过程中需要严格避免食物、粪便、血液和精液污染。尤其是血尿样本不适合用于尿白蛋白检测，因为血液中白蛋白浓度远高于正常尿液，少量血液污染即可造成白蛋白结果严重偏高。对于药物肾毒性、糖尿病肾病或炎症模型，若动物本身存在血尿或尿路感染，需要在数据解读时特别谨慎，必要时剔除污染样本或结合其他指标判断。

样本采集后通常不加防腐剂，必要时可离心澄清。短期保存可在4℃条件下存放至多1周；长期保存可在-60℃条件下存放至多2个月。检测前样本应恢复至室温并充分混匀。冻存样本解冻时不建议加热，避免蛋白状态变化或沉淀影响检测。对于纵向研究，建议所有样本尽可能采用一致的采样方式、保存时间和冻融次数，以减少前处理差异带来的批次偏差。

尿白蛋白ELISA操作中的关键细节

尿白蛋白ELISA实验开始前，所有试剂和样本应提前平衡至室温。标准品使用NHEBSA稀释液对MSA标准品进行7次1:2倍比稀释，得到0.156、0.313、0.625、1.25、2.5、5、10 μg/mL的标准系列。由于竞争性ELISA标准曲线方向与夹心法不同，建议在首次建曲线时重点检查空白孔、阴性对照、阳性对照和标准品复孔之间的关系，确认曲线形态合理后再分析样本。

尿液样本常规推荐1:21稀释，即10 μL样本加入200 μL稀释液。初次开展实验时，建议同时设置原液、1:21和1:81三个稀释度，以判断不同模型小鼠尿白蛋白水平是否落入标准曲线范围。每份样本应更换全新吸头，避免高浓度样本污染低浓度样本。标准品建议做复孔，样本也建议做复孔，以便发现加样误差或孔间差异。

加样后，除阴性对照孔外，每孔加入酶标抗体，封板后室温孵育30分钟。洗板共10个循环，可使用自来水或洗板缓冲液；若实验室水质或设备条件不稳定，也可选择专用TEA洗板缓冲液。随后加入TMB显色液，室温显色5–10分钟，加入终止液后以阴性对照孔为空白，在450 nm读取吸光度。结果计算时，以log10白蛋白浓度为横轴、平均吸光度为纵轴进行半对数线性拟合，将样本吸光度代入公式，取反对数得到稀释后浓度，再乘以稀释倍数得到原始尿白蛋白浓度。

图3. 尿白蛋白ELISA操作实验流程

尿肌酐检测操作中的关键细节

尿肌酐检测前，需要将0.5 M NaOH与苦味酸试剂按比例混合，配制碱性苦味酸工作液，并且现配现用。尿液样本通常使用蒸馏水做1:20稀释，根据样本实际肌酐浓度进一步调整稀释比例。由于肌酐检测最终用于UACR分母，若肌酐值偏离线性范围，会直接影响比值结果，因此不建议忽略稀释比例摸索。

加样时设置空白孔、三个浓度标准品复孔和样本复孔，每孔加入20 μL标准品或样本。随后每孔加入100 μL碱性苦味酸工作液，室温静置10分钟后读取初次吸光度；再加入100 μL酸试剂，室温静置5分钟后在相同波长读取第二次吸光度。通过计算加酸前后的吸光度差值ΔAbs，可以校正尿液中非肌酐色原对结果的影响。

图4. 尿肌酐检测操作实验流程

UACR如何换算和解释

UACR的计算方式是将同一份尿液样本中的尿白蛋白浓度除以尿肌酐浓度，并统一单位。常用单位包括μg/mg和mg/g，二者数值相等，因为1 mg/g等于1 μg/mg。举例来说，如果尿白蛋白浓度以μg/mL表示，尿肌酐浓度以mg/mL表示，则白蛋白除以肌酐后即可得到μg/mg；若转换为mg/g，数值保持一致。实际数据表格中应明确列出白蛋白浓度、肌酐浓度、稀释倍数和最终UACR，方便复核。

数据解读时需要注意，UACR并不是脱离背景的绝对肾功能分级指标。不同小鼠品系、性别、年龄、体重、肌肉量和基础代谢状态会影响尿肌酐排泄，因此UACR更适合同一模型体系内的组间比较，以及同一组动物在不同时间点的纵向追踪，不适合跨品系或脱离模型背景进行简单数值比较。对于糖尿病肾病等模型，尿白蛋白绝对浓度、24小时尿白蛋白排泄量和UACR最好共同报告，以增强结果解释力。

UACR不能替代完整肾功能评价

UACR反映的是尿蛋白排泄相对于肌酐校正后的水平，不能作为肾功能评估的唯一依据。完整肾病表型评价需要结合多维指标，包括尿白蛋白绝对浓度、24小时尿白蛋白排泄总量、肾小球滤过率、肾组织病理和分子标志物等。肾小球滤过率方面，菊粉清除、FITC-司替星经皮检测、碘海醇清除等方法更适合用于GFR评价；肌酐清除率可能因小鼠肾小管分泌肌酐而高估GFR，因此不宜作为金标准。

肾组织病理也是不可替代的维度。比如系膜基质扩张、肾小球基底膜厚度、足细胞数量、肾小管间质纤维化等形态学指标，可以帮助判断尿蛋白变化背后的组织结构基础。对于药物肾毒性研究，还可以结合肾小管损伤标志物、炎症因子、纤维化标志物和整体代谢表型综合分析。只有把UACR放在完整指标体系中，才能更准确解释肾损伤程度和干预效果。

小结

UACR的核心价值，是为尿白蛋白检测结果提供归一化校正，使随机尿和点尿样本在小鼠肾病研究中具有更好的可比性。Albuwell M竞争性ELISA用于小鼠尿白蛋白定量，Creatinine Companion改良Jaffe法用于尿肌酐检测，二者组合可以形成较完整的小鼠尿液UACR定量流程。实验中需要严格控制样本采集、保存、稀释、孵育、洗板、显色、标准曲线和单位换算等细节。

对于小鼠糖尿病肾病、药物肾毒性和遗传性肾病模型来说，UACR适合作为纵向监测和组间比较指标，但不应脱离模型背景独立解读。更稳妥的做法是将UACR与24小时尿白蛋白排泄量、GFR、肾组织病理和分子标志物联合使用，从而建立更完整的肾功能与肾损伤评价体系。

FAQ

1. 小鼠UACR为什么比单独尿白蛋白浓度更适合随机尿样本？

随机尿和点尿样本容易受到饮水量、排尿量和采样时段影响，尿液浓缩稀释程度差异较大。UACR同步检测尿白蛋白和尿肌酐，用肌酐校正尿液浓缩稀释，可以提升不同样本之间的可比性。

2. Albuwell M为什么是竞争性ELISA而不是夹心ELISA？

Albuwell M采用小鼠白蛋白预包被微孔板，样本中的白蛋白与固相白蛋白竞争结合HRP标记抗小鼠白蛋白抗体。样本白蛋白越高，固相结合酶标抗体越少，吸光度越低，因此需要使用竞争性ELISA的曲线逻辑进行计算。

3. 尿肌酐检测为什么要用加酸前后吸光度差值？

改良Jaffe法中，肌酐在碱性条件下与苦味酸形成有色复合物，加酸后该复合物会特异性分解，而部分非肌酐色原不受影响。计算加酸前后吸光度差值，可以降低非肌酐干扰，提高肌酐检测特异性。

4. UACR升高是否一定代表肾功能下降？

不一定。UACR升高提示尿白蛋白排泄相对增加，但结果会受到品系、年龄、性别、尿路感染、高血糖、高血压、运动、水负荷和采样方式等因素影响。肾功能评价应结合24小时尿白蛋白、GFR、肾组织病理和其他损伤标志物综合判断。

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关于技术来源

本文基于Ethos Exocell公开资料及相关技术信息曼博生物整理，用于科研信息分享、实验参考和小鼠UACR检测流程理解。小鼠尿白蛋白/肌酐比值检测涉及动物品系、采样方式、尿液保存、尿白蛋白ELISA、尿肌酐Jaffe法、标准曲线、稀释倍数、单位换算、24小时尿白蛋白排泄量和肾组织病理等多项变量，实际应用前仍需结合具体实验条件进行验证。本文围绕Ethos Exocell Albuwell M小鼠白蛋白ELISA检测试剂盒、Creatinine Companion尿肌酐检测试剂盒、小鼠UACR定量检测、糖尿病肾病模型、药物肾毒性和遗传性肾病研究等方向提供产品信息与技术资料支持。本文不作为临床诊断或动物实验结论判定建议，仅供科研与实验流程参考。