流式细胞术（Flow Cytometry）是现代生物学和医学研究中不可或缺的高通量分析技术，可实现对细胞表型、功能状态、细胞周期等多维度参数的快速检测。本文将从实验全流程出发，详解样本制备、上机操作、参数设置及结果处理的核心要点，帮助科研人员精准掌握流式实验关键技术。
一、样本制备：奠定实验成功的基础
（一）样本操作核心原则
- 单细胞悬液制备：将组织、血液、体液等样本处理为单细胞悬液，避免细胞团块和碎片干扰（死细胞易吸附抗体、产生自发荧光，碎片增加背景噪音）。
- 活性保护：减少机械损伤和化学试剂刺激，维持细胞抗原活性。
（二）三类常见样本制备方案
1. 组织样本（淋巴结、脾、肝等）
✓ 取材要点
- 新鲜组织立即放入生理盐水或 PBS，室温 12 小时内处理，4℃保存不超过 48 小时
- 禁止使用甲醛、乙醇固定剂及酶类处理
✓ 机械法制备流程
- 清洗组织：PBS 去除红细胞
- 剪切碎块：眼科剪剪成极小碎块，再次清洗
- 匀浆处理：匀浆器 + 少量 PBS 匀浆
- 过滤离心：300 目尼龙网过滤，1000-1500 rpm 离心 5 分钟
- 重悬细胞：PBS 重悬完成单细胞悬液制备
2. 外周血 / 骨髓样本
✓ 抗凝剂选择关键
| 抗凝剂 | 适用场景 | 保存时间 |
|---|
651
扫一扫
被折叠的 条评论
为什么被折叠?
到【灌水乐园】发言
