2020.9.9丨微生物多样性、宏基因组测序原理

本文深入探讨微生物多样性测序原理,包括一代测序的双脱氧链终止法和二代测序的桥式扩增,以及16S rDNA、18S rDNA、ITS1等目标区域在微生物分类鉴定中的应用。同时,介绍了宏基因组测序的优势,如克服纯培养限制,获取低丰度微生物信息,以及宏基因组binning在单菌组装和功能基因分析中的作用。
  • 微生物多样性测序原理及案例解析
    • 研究对象
      • 人类:口腔、皮肤、粪便、肠道...
      • 动物:瘤胃、肠道…
      • 植物:菌根、内生菌...
    • 历代测序原理
      • 一代测序
        • 双脱氧链终止法
          • 正常的DNA碱基是四种脱氧核糖核苷酸(dNTP),如果将这个碱基稍加改造,将一个-OH的氧去除,变成-CH2,就变成了一个双脱氧的核糖核苷酸(ddNTP)。在DNA合成的过程中加上这个ddNTP,由于ddNTP无法和下一个碱基链接,DNA链将无法继续延伸。
          • 缺点:成本高、通量低
      • 二代测序
        • PCR扩增阶段,将加好接头的待测DNA借助接头固定到一个叫flowcell的芯片上,由于两端同时固定扩增时待测序列成桥状也被成为桥式扩增,PCR反应后模板周围产生扩增产物聚集的一个个单克隆的DNA簇‘
        • 二代微生物多样性
          • 细菌
          • 真菌
          • 微生物功能基因
            • 细菌微生物多样性
              • 16S rDNA:编码原核核糖体小亚基rRNA的DNA序列。在结构上分为保守区和可变区。保守区反映生物物种间的亲缘关系,可变区反映物种间的差异。
            • 真菌微生物多样性
              • ITS1:位于真核生物核糖体rDNA序列18S和5.8S之间,ITS区域进化速率是18S rDNA的10倍之多。
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